产品介绍
嘌呤霉素(puromycin,1mg/ml)是一种氨基核苷类抗生素,可阻断原核/真核细胞蛋白质翻译,诱导未携带Puromycin抗性基因(PuroR)的细胞凋亡。本试剂为即用型无菌筛选液,主要用于慢病毒/腺病毒感染后的稳转细胞株阳性细胞筛选、shRNA/sgRNA稳定细胞系构建。
操作步骤(哺乳动物细胞筛选)
1. 嘌呤霉素杀灭曲线确定(目的稳定转染细胞株,仅供参考):为了筛选到稳定表达待研究的目的细胞株,确定杀死未转染细胞的最低嘌呤霉素至关重要。因此初次做实验的客户需要建立适合自己的实验体系的杀死曲线。
2. 细胞病毒感染 48 h 后开始加药筛选。
3. 更换含适宜浓度嘌呤霉素的完全培养基(如:0-15ug/ml浓度范围,至少准备5个梯度)。
4. 每日更换新鲜含药培养基。
5. 筛选3–5天,至空白对照组细胞全部死亡。
6. 存活细胞改用低浓度维持培养,获得稳转细胞株
注:所有细胞需提前进行嘌呤霉素杀伤浓度梯度测定
运输和保存方式
-20℃保存,冰袋运输,有效期12个月
注意事项
1. 本品具有细胞毒性及潜在遗传毒性,操作需佩戴手套,避免皮肤、黏膜接触。
2. 仅供体外细胞实验使用,不可用于人体、临床、体内注射。
3. 含药培养基建议现配现用。
4. 溶液浑浊、污染、变色禁止使用