产品介绍
本产品是一款高效、简单的慢病毒浓缩液(5X,无菌),可以对各种慢病毒颗粒进行简单快速的浓缩。该试剂操作简单,不需要超速离心或者过柱,仅需要将慢病毒浓缩液(5X,无菌)和慢病毒上清液按照 1:4比例混合,然后孵育一段时间,正常转速离心,即可得到浓缩的慢病毒颗粒,回收效率可以达到 90%以上,滴度最高可以提高到 100倍。
自备材料
离心机、离心管
操作步骤
1.收集慢病毒上清液,使用 0.45um滤膜过滤,去除细胞和碎片。
注意:过滤建议使用低蛋白吸附的醋酸酯纤维素膜或者聚醚砜(PES)膜,硝酸纤维膜(NC)易吸附病毒颗粒,不建议使用。
2.将慢病毒上清液与慢病毒浓缩液(5X,无菌)按照体积比 4:1比例混合(4份上清液,1份浓缩液)充分混匀;置于 4 ℃环境静置孵育,每30 min颠倒混匀一次,累计混匀 3次;4 ℃孵育 2 h或过夜处理。
注意:适当延长孵育时间可提升病毒回收率,但孵育总时长不宜超过 24 h。
3.4℃条件下,4000g离心 30分钟。
4.尽可能去除上清,避免剧烈震荡离心管,离心后管壁通常可见白色沉淀,部分情况不可见。
注意:若发生病毒沉淀重新弥散至上清的情况,可重复步骤 4再次离心收集沉淀。
5.用初始体积(原上清液体积)的 1/10-1/100的 DMEM培养基、PBS缓冲液或慢病毒保存液等重悬病毒颗粒,轻柔吹打混匀,所得重悬液即为浓缩慢病毒液。
注意:当沉淀肉眼不可见时,需在沉淀预期形成区域用移液器轻柔吹打,避免产生气泡造成病毒灭活。
6.浓缩后的病毒以 50ul/管分装,-80℃冰箱保存。
运输保存条件
4℃条件下保存,有效期 12个月,冰袋运输。
注意事项
1.为了您的安全和健康,实验过程中必须穿戴实验服、一次性手套和口罩。请勿随意丢弃病毒接触过的物品,并尽可能使用甲醛等灭活剂和紫外照射进行处理。
2.浓缩后慢病毒应避免反复冻融,反复冻融会造成病毒滴度下降。
3.本产品仅限科研使用。