产品介绍:
本产品为基于基因改造技术的超高保真DNA聚合酶,具备快速扩增、超高保真性(保真度为普通Taq
酶的200倍以上)和高效持续合成能力,耐受PCR抑制剂,在1–15 sec/kb的延伸速度下仍保持高扩增
效率与特异性,显著缩短反应PCR时间。超高保真 DNA 聚合酶结合高封闭率抗体,可在PCR变性前抑
制酶活性,防止非特异性扩增和引物降解,提升灵敏度与得率。其极强的3'→5'外切酶活性进一步增强
保真性,适用于分子克隆、高通量测序、定点突变等高精度PCR实验。本产品为2× SuperMix,含
dNTPs、Mg²⁺ 、优化缓冲液、增强剂及稳定剂,只需加入模板、引物和水至1×浓度即可反应。扩增
产物为平端,可直接用于无缝克隆。内含红色电泳指示剂,迁移速率相当于1%琼脂糖凝胶中1.5 kb的
双链线性DNA,可在 PCR 反应完成后直接点样电泳。
适用范围:
1. 超高保真 PCR 快速扩增,平端克隆,无缝克隆实验,基因定点突变
2. 低丰度模板、复杂模板或富含 GC/AT 模板的扩增
3. 长片段扩增
4. 高通量测序文库构建
产品特色:
显著缩短 PCR 操作时间
优化的缓冲液,可用于低丰度模板、复杂模板或富含 GC/AT 模板的扩增
基因组 DNA 片段的扩增(≥20 kb)
Plasmid DNA 片段的扩增(≥20 kb)
热启动,高特异性、高灵敏度和得率
操作说明
推荐 PCR 体系(以 50ul 反应体系为例)
a.使用时彻底融化、混匀。
b.不同模板最佳反应浓度有所不同,下表为 50 ul 体系推荐的模板用量:
PCR 条件
c. 退火温度可在 55-65℃之间优化
d. 延伸时间的设定可参考:
如无 PCR 扩增产物或需提高产物量,请适当延长延伸时间
保存条件:
-20 保存,有效期 24 个月。(注:本产品低温运输或冻存过程可能会形成少量黄色液体,属正常现象,可
在室温短时间放置后,颠倒混匀即可完全消除)
常见问题与解决方案
无产物或产物量少
1) 重复实验避免加样错误
2) 优化引物设计
3) 设置退火温度梯度,优化合适的退火温度
4) 使用高纯度模板并适当增加模板用量
5) 适当增加延伸时间 或 增加循环数至 35 - 40 个循环
6) 增加 Mg2+浓度至 3-4mM
有非特异性扩增产物或弥散条带
1) 设置退火温度梯度,优化合适的退火温度
2) 降低引物浓度至终浓度为 0.2 μM
3) 优化引物设计
4) 适当减少延伸时间 或减少扩增循环数至 25 - 30 个循环
5) 使用高纯度模板并适当减少模板用量