产品介绍
ePAGE 彩色凝胶快速制备试剂盒是一种采用上层胶和下层胶的新型预混液,在传统凝胶配方基础上进行了优化,仅需加入改进型促凝剂即可制胶,无需加 TEMED,避免恶臭气味。不仅简化和缩短凝胶配制步骤和时间,而且兼容传统的
Laemmli 体系中的 Tris-Glycine 电泳缓冲液,可以在高电压下快速完成蛋白电泳。在不同浓度胶体系中,上层胶的缓冲液中加入了颜色指示剂,使加样孔清晰可见,方便加样。
操作步骤
(一)下层胶配制:(以一块 0.75/1.0/1.5mm 的 mini 胶为例)
1. 分别量取等体积的下层胶溶液和下层胶缓冲液,各 2.0/2.7/4.0 ml,混匀。
2. 加入 40/60/80 ul 改进型促凝剂至上述步骤 1 的混合液中,混匀。
3. 将步骤 2 混合好的溶液,灌入制胶板内, 使液面和玻璃板上沿之间的距离比梳齿长 0.5cm 即可,加入适量的醇(如
乙醇,异丙醇等)或水,压平分离胶。
注意:此溶液是过量的,请勿全部注入,可留少许配胶杯中,以判断胶凝固情况。
4. 待下层胶凝固后(约 15 分钟),弃去上层水或醇,用滤纸吸取多余的水或醇。
注意:当水或醇和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝固。
(二)上层胶配制
1. 分别量取等体积的上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液,各 0.5/0.75/1.0 ml,轻柔混匀。
注意:由于红色颜料的理化性质,使用前请摇匀。
2. 向上述步骤 1 的混合液中加入 10/15/20 ul 改进型促凝剂,混匀。
3. 将步骤 2 配制好的溶液, 灌入制胶板内,缓慢插入梳子。
4. 待上层胶凝固后(约 15-20 分钟),取出梳子,上样, 在 Tris-Glycine 电泳缓冲液体系中, 电压 150V, 电泳 60 分
钟左右。
注意:推荐电泳条件为电压 150V, 电泳 60 分钟左右,可根据溴酚蓝位置,适当缩短或延长电泳时间。
成分及保存条件
本产品常温运输;保存在 4 度,其中改进型促凝剂保存于-20 度,保质期为 12 个月。
注意事项
1. 丙烯酰胺有神经毒性,请穿戴实验服及口罩经行相关的实验,若是不小心溅到身体上,请及时用流水清洗,若有需要,请前往医院咨询医生处理。
2. 本品因加入颜料,上层胶对样品没有强的浓缩效果,经过内部成分的优化,与传统凝胶相比,对蛋白条带分离效果更好,分辨率更高,蛋白条带更窄更锐利。
3. 改进型促凝剂的用量仅供参考,量越多的促凝剂可加速凝胶,反之亦然;凝胶速度与温度成显著正相关,温度越高凝胶速度越快,温度越低凝胶速度越慢,实际用量可根据个人实验习惯经验及环境适当调整。
4. 本产品已加入适量的 TEMED 替代品,如需要进一步提高凝胶速度,灌胶前溶液中可按需补充适量 TEMED。
5. 推荐电泳条件为电压 150V, 电泳 60 分钟左右,可根据溴酚蓝位置,适当缩短或延长电泳时间。
6. 为避免凝胶中气泡的形成,建议在配胶之前,使胶溶液及缓冲液平衡到室温(如室温放置几分钟)。
7. 本产品仅用于科学研究。
胶浓度选择参考
本图为 Tris-Glycine 缓冲液体系中,蛋白分子量在不同浓度的 SDS-PAGE 凝胶中的分离示意图。
可能会因温度、pH 值等因素不同,实际分离情况会略有些出入,本图仅供参考。例如在 12.5%浓度的下层胶中,10KD 的蛋白 marker 条带有时会分离不出来。