产品介绍
本试剂盒可以快速从≤3x106个细胞以及≤10mg 组织中提取总 RNA。本产品使用的裂解液（RLQ Lysis Buffer）可以迅速裂解细胞和组织的同时抑制 RNA 酶作用，且在乙醇辅助结合条件下高效地将 RNA 结合在纯化柱硅胶膜上，杂质再经过洗涤过程被有效去除，洗脱后获得纯净的总 RNA。全流程操作简单迅速且纯化获得的 RNA 可直接用于 RT-PCR，Northern Blot，Poly(A)+筛选等多种分子生物实验。
产品特色
* 安全性高：无需使用苯酚，氯仿等有毒试剂
* 使用范围广：对适量细胞和动物组织提取均适用
* 操作简单快速：室温操作，最快 8 分钟内可完成全纯化步骤
产品成分
*首次使用前，于 RWB Wash Buffer 中加入标签指定量无水乙醇（40 ml 无水乙醇），充分混匀后使用，并做好标记。
*注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季低温环境时）,可 37℃温浴至溶液澄清，避免影响使用效果。
运输和保存方式
*常温运输，室温避光保存，有效期 12 个月（2-4°C 可保存更长时间）。
*REB Elution Buffer 建议多管分装使用。
注意事项
1. 预防 RNase 污染， 避免 RNA 降解，使用无 RNase 的塑料制品和枪头；操作时要戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2. 应尽量使用新鲜的实验样本，确保提取的 RNA 不被降解。
3. 使用组织研磨仪时，应注意低温研磨及优化研磨条件，确保研磨充分；如使用液氮研磨组织，应随时加入液氮，避免 RNA 降解。
4. 本试剂盒最适上样量能满足大部分的样本，但对核酸含量过高或核酸含量过低的样本，可根据需求减少或增加样本的起始量。
5. 整个 RNA 提取的操作过程必须在室温进行，不可置于冰上，直至洗脱之后获得的 RNA 方可置于冰上，避免产生的不溶物堵塞 RNA 纯化柱。
6. 不同样本充分裂解的时间会存在差异，正常高速振荡混匀或用移液枪反复吹打 30s-2min 即可充分裂解。若样本呈粘稠状，需要适当延长裂解时间或增加 RLQ Lysis Buffer 裂解液。对于组织样本，有些需要优化研磨或者匀浆条件，使得组织充分裂解释放出 RNA。
7. 样本需要充分裂解，否则可能会堵塞快速 RNA 纯化柱，影响 RNA 的回收及纯度。样本量较大时，需要适当增加裂解液使用量，并使用多个快速 RNA 纯化柱进行纯化操作。
8. 快速 RNA 纯化柱的最大容量是 700ul,使用时，如果液体的体积超过最大容积，请分批加入。
9. 细胞或组织裂解物，上柱前需要加入等体积的无水乙醇，充分混匀后加入快速 RNA 纯化柱中离心。
注意事项
样品裂解步骤
不同的样本类型，需要选择不同的裂解步骤进行实验，如果处理的样本量增大或处理样本核酸含量过高，可以按比例增加裂解液体积，使用多个快速 RNA 纯化柱进行实验操作。
贴壁培养的细胞：
1. 移除培养基，用 1X PBS 清洗细胞一次。
2. 在培养板中直接加入 500ul (≤3x106 细胞 ) RLQ Lysis Buffer 裂解液，水平放置片刻，便于裂解液均匀分布细胞表面来裂解。
3. 使用移液器吹打细胞并移至收集管中，高速振荡混匀或用移液枪反复吹打 30s-2min ，直至匀浆液清亮且不粘稠。
4. 匀浆液室温静置 2min。（可以在培养板中直接加入等体积的无水乙醇，转移至 RNA 快速纯化柱进行后续操作）。
注意：
（1）对于 T 细胞/B 细胞等体积很小，RNA 含量低的细胞，建议增加细胞数量，最少 1x106细胞，最大可 1x107细胞。
（2）不方便直接裂解的培养容器，可以使用细胞刮子刮下细胞或者胰蛋白酶消化后，将细胞收集到离心管中。
（3）通常十二孔板 70%以上密度，六孔板 40%左右密度能获得较好的效果。若六孔板细胞密度在 80%以上，建议在板中加入
1ml RLQ Lysis Buffer 裂解液，然后加入等体积的无水乙醇，转入 2 个纯化柱或者分次加入纯化柱进行后续操作。
悬浮培养的细胞：
1. 将悬浮培养的细胞和培养基一起移入离心管，离心收集细胞。 使用 1X PBS 清洗一次，12,000rpm 离心 1min,弃去上清。
2. 加入 500ul (≤3x106 细胞 ) RLQ Lysis Buffer 裂解液。
3. 使用移液器吹打细胞并移至收集管中，高速振荡混匀或用移液枪反复吹打 30s-2min ，直至匀浆液清亮且不粘稠。
4. 匀浆液室温静置 2min。
注意：正常情况下，高速振荡混匀或用移液枪反复吹打 30s-2min 即可充分裂解，若样本仍呈粘稠状，可适当延长裂解时间。
动物组织样本的裂解：（适合内脏组织，肿瘤组织等，不适合皮肤，骨等坚硬组织）
1. 向新鲜组织或者-80°C 冻存的组织样本加入 300μl (≤10mg 组织）RLQ Lysis Buffer 裂解液，然后用玻璃匀浆器或者电动匀浆器将组织研磨 3-5min，彻底匀浆直至没有明显沉淀。
2. 研磨充分之后，如匀浆液不足 300ul，添加 RLQ Lysis Buffer 裂解液补足 300ul，振荡混匀。
3. 12,000 rpm，4°C 离心 5 分钟。将上清转移至新的 1.5ml 离心管中。
注意：
（1）正常情况下，内脏组织，肿瘤组织等研磨 3-5min 即可充分裂解，若样本仍有明显沉淀，可适当延长研磨时间。若组织相对坚硬，难研磨等，需要优化研磨条件，直至组织充分裂解。
（2）样本充分裂解后，若残留少量未裂解的沉淀物可通过后续离心去除。
RNA 纯化步骤
1. 向上述裂解的细胞或组织中加入等体积的无水乙醇，用移液枪吹打混匀（若产生沉淀，是正常现象，可用移液枪多次吹打，
打散沉淀）。
2. 将液体转入 RNA 纯化柱，室温 12,000rpm 离心 1 分钟，弃废液（若液体超过 700ul,可以分 2 次加入）。
可选步骤：若实验对基因组的少量残留极其敏感，可以用 DNA 酶进行处理（可选择本公司 DNA 酶，货号 N1015)，按每个样品加入 2ul 的 DNA 酶和 10ul 的 REB Elution Buffer 的量，先混合后向每个纯化柱中央加 12ul，室温静置 5 分钟，
然后加入 RWB Wash Buffer，进行后续操作。
3. 向 RNA 纯化柱中加入 700ul 的 RWB Wash Buffer (确认已经加入指定体积的无水乙醇），室温 12,000rpm 离心 1 分钟弃废液。
4. 将 RNA 纯化柱装回收集管中，室温 12,000rpm 离心空转 1-2 分钟，弃废液。
5. 将 RNA 纯化柱放到干净的 RNase Free 的 1.5ml 离心管上，开盖晾干 2 分钟。
6. 向吸附柱膜的中央处加入 20-50ul 的 REB Elution Buffer 或 RNase Free Water，室温静置 2 分钟，
然后 12,000rpm 离心 1 分钟洗脱 RNA。
7. 测定洗脱的 RNA 浓度，进行后续实验。提取的 RNA 可立即用于后续实验，也可以在-80°C 保存备用。
