产品介绍
本产品包括通过基因改造技术实现快速扩增和超⾼保真的 DNA 聚合酶，延伸速度可达 4 kb/min。同时含 有 dNTPs、Mg2+、优化的反应缓冲液、PCR 反应的稳定剂等，浓度为 2×。由于使⽤的超⾼保真 DNA 聚 合酶具有极强的 3' → 5' 外切酶活性，与普通⾼保真酶相⽐，保真性更⾼，是普通 Taq DNA Polymerase 的 100 倍以上。DNA 扩增时，只需加⼊模板、引物和⽔，使 SuperMix 溶液的浓度为 1× 即可进⾏反应。 扩 增产物为平端，可直接⽤于⽆缝克隆实验。同时，反应产物可直接上样，通过琼脂糖凝胶电泳检测。本产品 包含红⾊电泳指示剂，指示带在 1% 琼脂糖凝胶中的迁移速率与 1.5 kb 双链线性 DNA 相当。
适用范围
1. 超⾼保真 PCR 快速扩增，平端克隆，⽆缝克隆实验，基因定点突变。
2. 低丰度模板、复杂模板或富含 GC/AT 模板的扩增。
3. ⻓⽚段扩增
产品特色
Ø 减少 PCR 操作时间
Ø 避免因多步操作带来的污染
Ø 优化的缓冲液，可⽤于低丰度模板、复杂模板或富含 GC/AT 模板的扩增
Ø 基因组 DNA ⽚段的扩增(≤15 kb)
Ø Plasmid DNA ⽚段的扩增(≤15 kb)
Ø 热启动，⾼特异性
操作说明
推荐 PCR 体系（以 50ul 反应体系为例）
名称 | 体积 | 终浓度 |
2 X M7 Max Super Mix (Dye Plus)a | 25ul | 1 X |
10 μM Forward Primer | 1ul | 0.2 uM |
10 μM Reverse Primer | 1ul | 0.2 uM |
PCR-grade Water | As Required | - |
Template b | As Required | As Required |
总体积 | 50ul | - |
a.使⽤时彻底融化、混匀。
b.不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为 50 ul 体系推荐的模板⽤量:
模板种类 | 模板起始量 |
基因组 DNA | 10 - 400 ng |
质粒 DNA | 10 pg - 5 ng |
病毒 DNA | 10 pg - 10 ng |
cDNA | 1 - 5 ul |
PCR 条件
Step | Temperature | Duration | Cycles |
Initial Denaturation | 98°C | 30 sec | 1 |
Denaturation | 98°C | 10 sec | 25-35 |
Annealing c | 55-65°C | 30 sec | 25-35 |
Extension | 72°C | 15-30 sec/kb | 25-35 |
Final Extension | 72°C | 5 min | 1 |
c. 推荐使⽤退⽕温度 60°C。
保存条件
-20 保存，有效期 24 个⽉。
保存条件常⻅问题与解决⽅案
Ø ⽆产物或产物量少
1) 重复实验避免加样错误
2) 优化引物设计
3) 设置退⽕温度梯度，优化合适的退⽕温度
4) 使⽤⾼纯度模板并适当增加模板⽤量
5) 适当增加延伸时间
6) 增加循环数⾄ 35 - 40 个循环
7) 增加 Mg2+ 浓度⾄ 3-4mM
Ø 有⾮特异性扩增产物或弥散条带
1) 设置退⽕温度梯度，优化合适的退⽕温度
2) 降低引物浓度⾄终浓度为 0.2 μM
3) 优化引物设计
4) 适当减少延伸时间
5) 减少扩增循环数⾄ 25 - 30 个循环
6) 使⽤⾼纯度模板并适当减少模板⽤量
