产品介绍
NCMScript All-in-One RTpremix with dsDNase 一款含去除基因组酶的一管式高效逆转录产品，可将 RNA 逆转 录成为 cDNA，含有第一链 cDN 合成所需的所有试剂，只需加入 RNA 模板和水即可进行逆转录反应。合成 的第一链 cDNA(最长可达 15kd)可广泛用于文库构建、第二链合成、杂交、PCR 扩增、 RT-qPCR 检测等。
产品组分
组成成分 | M7010 | M7100 |
5× RT Mix a | 40ul | 400ul |
All-in-one Enzyme Mix b | 30ul | 300ul |
DEPC-treated H2O | 400ul | 2×1 ml |
a. 包含 Buffer、dNTPs、Random Hexamer Primer/Oligo (dT)20 Primer Mix。
b. 包含 ExonScript Reverse Transcriptase、Ribonuclease Inhibitor 和 dsDNase。
操作步骤
1. 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液，轻轻混匀并瞬离以下成分:
成分 | 体积 |
10 pg- 5 μg Total RNA or 10 pg- 500 ng mRNA c | 按需 |
DEPC-treated H2O | up to 13ul |
5×RT Mix d | 4ul |
All-in-one Enzyme Mix | 3ul |
总体积 | 20ul |
c. 为保证逆转录成功，请使用高质量 RNA 模板。
d. 5× RT Mix 在使用前需充分混匀。
2. 按照下表所示进行逆转录反应:
反应温度 | 反应时间 | 目的 |
37°C e | 2min | 随机引物与RNA 模板配对及去除基因组DNA |
55°C | 15min | 逆转录反应及 dsDNase快速灭活 |
85°C | 5min | 逆转录酶灭活 |
e. 复杂模板可以采用 25°C 10 min，充分让引物和模板结合。
3. 产物可立即用于 PCR 或 qPCR，或-20°C 保存半年内使用；长期建议分装在 -70°C 保存；cDNA 避免反复冻融。
运输和保存方式
冰袋低温运输；-20°C 保存两年。
