产品介绍
ACK 红细胞裂解液是一种利用细胞内外存在的盐离子浓度差而导致细胞膜胀破的原理,可以从人或 鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。本产品主要成分是氯化铵,经无菌处理, 主要用于经酶消化分散的组织和淋巴细胞的分离纯化,以及组织细胞的蛋白与核酸提取等实验中的红细 胞去除。
操作步骤
一:血液样本处理
1. 向 1 倍体积的新鲜全血加入 3-5 倍的 ACK 红细胞裂解液(如 1ml 新鲜全血加入 3-5ml ACK 红细胞裂解液),轻柔涡旋 或者颠倒混匀。
2. 冰上放置 5-10 分钟,期间轻轻涡旋混匀两次,红细胞裂解后,为清亮透明的溶液。
3. 收集细胞:4℃,400-500g 离心 5 分钟,沉淀细胞,小心吸除上清液。
注意:如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤,进行短时多次裂解。
4. 向细胞沉淀中加入 5 倍体积的 PBS、HBSS、生理盐水或者无血清培养基等溶液(如开始血液为 1ml,则加入 5ml 上述溶 液),轻柔涡旋充分重悬细胞。
5. 将上一步溶液 4℃,400-500g 离心 5 分钟,沉淀细胞,小心并彻底吸除上清液(可重复洗涤一次,共洗涤 1-2 次)。
6. 适量溶液重悬细胞,用于后续实验。如提取 RNA,建议此步开始使用 RNase-free 水配制的溶液进行后续操作。
一:组织细胞样本处理
1. 新鲜组织细胞经胶原酶或者胰酶等消化处理,分散成单个细胞悬液,离心弃除上清。
2. 向 1 倍体积细胞沉淀加入 5-8 倍的 ACK 红细胞裂解液(如 0.5ml 细胞沉淀体积加入 2.5-4ml ACK 红细胞裂解液),轻柔涡旋或者颠倒混匀。
3. 冰上放置 5-10 分钟,期间轻轻涡旋混匀两次,红细胞裂解后,为清亮透明的溶液。
4. 收集细胞:4℃,400-500g 离心 10 分钟,沉淀细胞,小心吸除上清液。
注意:如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤,进行短时多次裂解。
5. 向细胞沉淀中加入 15-20ml 的 PBS、HBSS、生理盐水或者无血清培养基等溶液,轻柔涡旋充分重悬细胞。
6. 将上一步溶液 4℃,400-500g 离心 5 分钟,沉淀细胞,小心并彻底吸除上清液(可重复洗涤一次,共洗涤 1-2 次)。
7. 适量溶液重悬细胞,用于后续实验。如提取 RNA,建议此步开始使用 RNase-free 水配制的溶液进行后续操作。
保存条件
4℃保存,一年有效,室温运输。
注意事项
1. 本裂解液是无菌产品,分离细胞用于细胞培养时,请注意无菌操作
2. 本品仅限于哺乳类动物无核红细胞裂解(不适用于有核红细胞,如鸟或禽类等)