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蛋白/免疫学系列产品

Western及IP细胞裂解液

Western及IP细胞裂解液

货号:
P70100
规格:
100ml
目录价:
¥150.00
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产品介绍

新赛美生物生产的 Western IP 细胞裂解液 (Cell Lysis Buffer for Western and IP without Inhibitors),是一种在非变 性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液可以有效地裂解细胞蛋白,同时不会释放出基因组 DNA 等物质,亦 不会破坏蛋白的结构,处理好的样品可以用于 PAGEWestern,免疫沉淀(Immunol precipitationIP),免疫共沉淀 (Co-IP),以及许多兼容 1%NP-40 的酶活性或者生物小分子的检测。本细胞裂解液的主要成分为 25mM TrisHcl(pH7.4)150mM NaCl1% NP-40 5%glycerol 等,可有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

操作步骤

 对于培养细胞样品(仅供参考)

1. 取适当量的 Western IP 细胞裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM。 注意: Western IP 细胞裂解液不含蛋白酶等抑制剂,根据需要在使用前添加蛋白酶,磷酸酶等抑制剂。 

2.对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。 按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂 解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加 入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50- 100 万细胞/管,然后再裂解。 

对于组织样品: 

1. 把组织剪切成细小的碎片。 

2. 取适当量的 Western IP 细胞裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM。 

3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解 液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量

 4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 

5. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGEWestern 和免疫沉淀等操作。 

6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样 离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得 比较充分。 

注意事项:

1. 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融, 可以适当分装后使用。 

2. 本裂解液不含有抑制剂,根据实验的需要,加入相应的蛋白酶或磷酸酶抑制剂。 

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

【1】Li Q, Zhang X X, Hu L P, et al. Co-evolution of tumor cells and hepatocytes fostered by SLIT2-ROBO1 axis facilitates liver metastasis of pancreatic ductal adenocarcinoma[J]. 2021.

【2】Chen H, Zhu X, Sun R, et al. Ubiquitin-specific protease 7 is a druggable target that is essential for pancreatic cancer growth and chemoresistance[J]. Investigational New Drugs, 2020, 38: 1707-1716.(IF=3.850)


 


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