2025年5月21日，中南大学湘雅二医院研究团队在国际权威期刊 《Signal Transduction and Targeted Therapy》 （最新影响因子40.6）在线发表研究论文“PKMYT1 kinase ameliorates cisplatin sensitivity in osteosarcoma”。该研究揭示 PKMYT1 通过 “磷酸化 NPM1-SUMO 化竞争 - DNA 修复障碍” 轴调控骨肉瘤顺铂敏感性的新机制，证实 PKMYT1 可作为逆转顺铂耐药的潜在靶点。


研究摘要 
顺铂（DDP）是骨肉瘤（OS）的一线化疗药物，但其广泛存在的耐药性严重限制了临床疗效；本研究通过全激酶组CRISPR筛选结合转录组测序，发现蛋白激酶PKMYT1是OS顺铂敏感性的关键调节因子，患者样本及体外实验显示DDP处理可激活OS细胞中的PKMYT1，其沉默显著增强细胞对DDP的敏感性；机制上，PKMYT1诱导核磷蛋白1（NPM1）的S260位点磷酸化，竞争性抑制NPM1的SUMO化修饰，干扰乳腺癌抑制基因1（BRCA1）、受体相关蛋白80（RAP80）和RAD51等DNA损伤修复因子的招募，影响双链断裂（DSB）修复效率；选择性PKMYT1抑制剂RP6306与DDP联用可协同增强对OS细胞的杀伤效应；研究揭示PKMYT1通过调控NPM1磷酸化介导顺铂耐药，为克服OS的顺铂耐药提供了潜在治疗靶点及联合用药策略。

研究主要采用以下技术方法：

1.CRISPR-Cas9 筛选：利用含 507 个人类激酶基因的 CRISPR 文库，在 143B 细胞中筛选顺铂敏感性相关基因，通过 MAGeCK 算法分析差异富集基因。

2.转录组测序与生物信息学分析：对 23 例骨肉瘤组织和 13 例癌旁正常组织进行测序，筛选差异表达基因并与 CRISPR 筛选结果交叉验证。

3.体内外功能验证：构建 PKMYT1 敲除（sgPKMYT1）和 NPM1 敲低（shNPM1）细胞系，通过 MTT、克隆形成、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及周期变化；利用 BALB/c 裸鼠皮下移植瘤模型和胫骨原位移植瘤模型验证药物敏感性。

4.分子机制研究：通过免疫共沉淀（Co-IP）、GST pull-down、磷酸化蛋白质组学鉴定 PKMYT1 与 NPM1 的相互作用及磷酸化位点；利用免疫荧光染色观察 BRCA1、RAD51 等 DNA 修复蛋白的焦点形成；通过同源重组（HR）和非同源末端连接（NHEJ）修复实验评估修复效率。

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